重生之玩遍女明星目录,庙中求子被僧人C燕氏,辣文小寡妇,性奴大乳清纯校花调教记

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      1. 質譜技術

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        特色糖基化蛋白質組學
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        特色糖基化蛋白質組學

        華盈生物利用酶的特異性,將蛋白切成多肽,并通過富集方法獲取含有聚糖的糖肽,利用高能碰撞碎裂質譜將糖肽逐級碎裂,獲取質譜各級離子信息。并通過專利質譜數據比對軟件和自建的70000條糖肽數據庫,對多肽的糖基化位點和糖鏈結構進行對比分析,既可以保留糖基化位點信息,又可以解析糖的結構,在糖基化對比組學研究中具有獨特的優勢。
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        產品描述

               糖基化是在酶的控制下,蛋白質附加上糖類的過程,起始于內質網,結束于高爾基體。 在糖基轉移酶作用下將糖轉移至蛋白質,和蛋白質上的氨基酸殘基形成糖苷鍵。 真核生物中,一半以上的蛋白質可發生糖基化形成糖蛋白,其中90%是N-糖蛋白。糖基化具有非常重要和廣泛的功能:① 對細胞具有保護、穩定及屏障等多方面作用;② 可作為外源性受體的特異性配體,某些糖鏈可作為各種病毒、細菌及寄生物的特異受體;③ 糖鏈也可作為內源性受體的特異性配體,介導清除、周轉及胞內穿行;④  糖鏈在受精過程中也起著重要的作用。

         
         
         

               一般情況下,將糖基化修飾分為N- 糖基化和 O-糖基化兩種大類:N- 糖基化是指糖鏈與蛋白質天冬氨酸上的氨基基團通過共價連接而形成的糖蛋白。滿足氨基酸序列Asn-X-Thr/Ser/Cys(X≠Pro),具有經典的核心五糖結構(Man3GlcNAc2)。O-糖基化:通過糖苷鍵與Ser、Thr、羥基賴氨酸(膠原)或Tyr(糖原蛋白)的羥基相連。較短,無核心結構。因此,O-糖基化的糖鏈結構的解析難度要高于N- 糖基化。同時,糖基化修飾具有宏觀和微觀不均一性,相同的糖鏈可以修飾同一蛋白的不同位點,同一位點也可以修飾不同結構的糖鏈,其解析難度非常大,成為糖基化研究的難點問題。

        |   特色糖基化蛋白組學

                傳統的糖蛋白研究平臺,一般通過糖苷酶將聚糖從多肽上切除(要么保留多肽,要么保留糖鏈),然后通過質譜解析獲得多肽上的糖基化修飾位點,或者解析糖鏈結構。這些策略要么喪失了糖結構信息,要么丟失了多肽位點信息,無法做到糖結構與多肽位點的對應分析,失去了糖基化蛋白組學研究的核心信息。

                華盈生物利用酶的特異性,將蛋白切成多肽,并通過富集方法獲取含有聚糖的糖肽,利用高能碰撞碎裂質譜將糖肽逐級碎裂,獲取質譜各級離子信息。并通過專利質譜數據比對軟件和自建的70000條糖肽數據庫,對多肽的糖基化位點和糖鏈結構進行對比分析,既可以保留糖基化位點信息,又可以解析糖的結構,在糖基化對比組學研究中具有獨特的優勢。

               同時,華盈生物還可通過高通量凝集素芯片與糖基化蛋白組質譜技術的組合,完成更為復雜的研究課題。我們可以通過高通量凝集素芯片技術對大批量臨床樣本中的糖蛋白譜進行差異篩選,找到候選標志物;再對特定凝集素識別的糖蛋白進行糖基化蛋白組質譜解析獲得完整的糖譜結構和糖基化位點圖譜。

         

        |   數據結果

        1.  實驗步驟(中英文)

        2.  質譜儀采集的原始數據

        3.  基于靶向-誘餌庫搜索和譜圖水平FDR控制的完整N-糖肽IDs的全面鑒定信息,包括多肽骨架(氨基酸序列、潛在N-糖基化位點)和N-連接糖部分(單糖組成、潛在序列和糖苷鍵連接結構);其中N-糖基化位點進一步得到位點決定性碎片離子確認,序列和連接結構進一步得到結構診斷碎片離子的確認。

        4.  差異蛋白生信分析結果

         

        |   樣本要求

        樣本形式:新鮮冷凍組織,FFPE組織,體液(血漿血清、尿液),細胞,完整蛋白,多肽

        樣本量:動物組織>1 g;植物組織>200 mg;血液樣本>1 mL(注意用EDTA防凝);血清>0.5 mL;尿液>2 mL;細胞>5×10^7;酵母/微生物>200 mg

        注意要點:盡量避免使用表面活性劑(SDS、Triton-X)和無機鹽

         

        |   經典案例

              從臨床樣本中分析發現,乳腺癌在發生發展過程中存在一種叫作平分型GlcNAc的N-糖基化修飾的水平顯著下降的現象,并與乳腺癌生存期密切相關。進一步研究發現,侵襲能力較強的乳腺癌細胞分泌的細胞外囊泡上的膜蛋白也低表達平分型GlcNAc修飾。由此提出假設,可能轉移能力較弱的乳腺癌細胞(受體細胞)的轉移能力會被轉移能力較強的乳腺癌細胞(供體細胞)通過分泌外泌體的方式激活。
         

               

               于是,研究人員利用特定凝集素Lectin富集結合質譜分析的策略分析了外泌體處理后的乳腺癌細胞表面糖蛋白的改變,發現細胞膜蛋白integrin β1可能受到平分型GlcNAc修飾的調控。進一步,通過糖基化蛋白組質譜分析,解析了GlcNAc修飾的糖結構,證實了其與integrin β1結合的能力及結合位點。通過阻斷實驗,得出最終結論:平分型GlcNAc修飾具有通過抑制糖鏈的延伸,改變蛋白質的糖基化修飾水平,從而影響受體細胞膜蛋白integrin β1及其下游FAK-AKT通路的激活,進而抑制受體乳腺癌細胞侵襲的能力。然而,轉移能力較強的乳腺癌細胞均低表達平分型GlcNAc修飾,使得其分泌的外泌體具備了誘導受體乳腺癌細胞加速轉移的能力。

         

        |   相關文獻

        [1]. Xu Junying,Y ang Xuejing, Mao Yong, et al. Removal of N-Linked Glycosylation Enhances PD-L1 Detection in Colon Cancer: Validation Research Based on Immunohistochemistry Analysis. Technol Cancer Res Treat, 2021, 20: 15330338211019442.

        [2]. Tan Zengqi, Cao Lin, Wu Yurong, et al. Bisecting GlcNAc modification diminishes the pro-metastatic functions of small extracellular vesicles from breast cancer cells. J Extracell Vesicles, 2020, 10: e12005.

        [3]. Jingyun Yang, Wei Wang, Zimin Chen, et al. A vaccine targeting the RBD of the S protein of SARS-CoV-2 induces protective immunity. Nature, 2020, 586: 572–577.

        [4]. Wang Yue, Xu Feifei, Chen Yun, et al. A quantitative N-glycoproteomics study of cell-surface N-glycoprotein markers of MCF-7/ADR cancer stem cells.[J] .Anal Bioanal Chem, 2020, 412: 2423-2432.

        [5]. Xu Feifei, Wang Yue, Xiao Kaijie, et al. Quantitative site- and structure-specific N-glycoproteomics characterization of differential N-glycosylation in MCF-7/ADR cancer stem cells. Clin Proteomics, 2020, 17: 3.

        [6]. Xue Bingbing, Xiao Kaijie, Wang Yue, et al. Site- and structure-specific quantitative N-glycoproteomics study of differential N-glycosylation in MCF-7 cancer cells. J Proteomics, 2020, 212: 103594.

         

         

        關鍵詞:
        糖基化、糖蛋白、糖蛋白組學、N糖、糖修飾、糖苷鍵
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        發布時間:2021-08-11 17:21:10

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