重生之玩遍女明星目录,庙中求子被僧人C燕氏,辣文小寡妇,性奴大乳清纯校花调教记

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      1. 質譜技術

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        磷酸化定量蛋白質組學
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        磷酸化定量蛋白質組學

        磷酸化蛋白質組技術首先將蛋白樣本酶解為肽段,再利用TiO2等富集磷酸化肽段,通過高分辨率、高掃描速度的質譜進行大規模鑒定,利用得到的質譜譜圖與相應數據庫搜索比較,得到肽段序列結果,通過生物信息軟件計算出磷酸化位點。
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        產品描述

               翻譯后修飾是蛋白質調節功能的重要方式,在生命現象的許多關鍵調節機制中,蛋白質的磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導、細胞周期、生長發育以及癌癥機理等諸多生物學問題密切相關。因此,對于蛋白質磷酸化的研究對闡明蛋白質的功能具有重要意義。


               磷酸化蛋白質組以組織、細胞等較為復雜樣本為研究對象,目的在于鑒定樣品中發生磷酸化的蛋白質以及相應的位點。對蛋白樣本進行酶解,TiO2 富集磷酸化肽段,通過高分辨率、高掃描速度的質譜進行大規模鑒定,利用得到的質譜譜圖與相應數據庫搜索比較,得到肽段序列結果,通過生物信息軟件計算出磷酸化位點和定量信息。磷酸化定量蛋白組分為Label free和iTRAQ/TMT標記兩種主流技術路線。

         
         
         
         
                 
           磷酸化非標記定量蛋白組學(Label free 法)     

         

               Label free策略是根據一級質譜相關的磷酸化肽段峰強度、峰面積、液相色譜保留時間等信息,基于磷酸化肽段母離子強度(或色譜離子流的峰面積),以一級質譜MS1為定量基礎,計算每個磷酸化肽段的信號強度在LC-MS色譜上的積分,進行磷酸化定量。

         

        |   技術路線

         

        |   技術優勢

        1.  無需昂貴的同位素標記試劑,實驗耗費低

        2.  不受樣本數量限制,克服了標記定量技術在對多個樣本進行定量方面的缺陷

        3.   對樣本的操作少,從而使其最接近原始狀態

         

         磷酸化標記定量蛋白組學(iTRAQ/TMT法)     

               

                標記定量策略是根據報告離子的峰面積計算同一蛋白質同一磷酸化肽段在不同樣品間的比值,從而實現磷酸化蛋白的相對和絕對定量。不同標記試劑與來源于不同樣品胰酶消化后的肽段結合,經過色譜分離,并通過一級質譜和二級質譜。平衡基團在二級質譜發生中性丟失,報告基團在二級質譜低質量區域產生多個報告離子,其信號強度分別代表該標記樣品的表達量。

         

        |   技術路線

         

        |   技術優勢

        1.  iTRAQ可同時對8個樣本進行分析,TMT可同時對16個樣本進行分析

        2.  定量更準確,重復性高

        3.  蛋白檢測范圍廣,鑒定磷酸化位點多

         

        |   樣本要求

         

        |   經典案例

              生物鐘作為生物體內一種無形的時鐘,控制著生物體內幾乎全部的代謝過程,并且其自身會不斷優化以保證生物體的穩態和代謝健康。Robles等學者對小鼠肝臟的晝夜節律性磷酸化蛋白組進行了分析,結果發現,25%的磷酸化肽段,40%的磷酸化蛋白,其磷酸化水平出現顯著的節奏性波動。小鼠肝臟組織中共鑒定到20,404個磷酸化肽段,20,076個磷酸化位點, 4,461個磷酸化蛋白,且定量重復性較高。磷酸化修飾組和蛋白組在一天之內的不同時期表達水平差異很大,并且磷酸化修飾組的表達差異更大,一天之內出現約5倍的表達差異,顯著高于蛋白組變化的水平。同時80%的磷酸化累積強度來自于20 %的磷酸化水平規律變化的蛋白,表明磷酸化水平振動的蛋白為調節蛋白而非結構蛋白。

               

             研究人員進一步在CLOCK蛋白上發現了新的磷酸化位點S446和S440/441 (圖6C),其磷酸化水平也出現周期性的變化,由于CLOCK蛋白表達量是恒定的,表明磷酸化水平的變化是調節該蛋白節律功能的主要因素。上述結果均說明磷酸化依賴的信號通路對晝夜節律調節起主導作用。通過KEGG通路富集分析,研究人員發現了晝夜節律相關的肝臟磷酸化蛋白質組富含來自代謝途徑的蛋白質。通過進行激酶-底物篩選等實驗最終得出結論:小鼠體內的磷酸化周期是通過激活一組導致信號通路暫時整合的激酶來實現的,并最終調節影響細胞能量狀態的代謝過程。

         

         相關文獻

        [1].  Chen XJ, et al. Homoharringtonine deregulates transcriptional expression by directly binding NF-κB repressing factor. Proc Natl Acad Sci U S A. 2019 Feb 5;116(6):2220-2225.

        [2].  Wang ZQ, Ma J, Miyoshi Chika, et al. Quantitative phosphoproteomic analysis of the molecular substrates of sleep need. Nature, 2018, 558: 435-439.

        [3].  Huang H, et al. Kisspeptin/GPR54 signaling restricts antiviral innate immune response through regulating calcineurin phosphatase activity. Science Advances, 2018, 4(8): eaas9784. 

        [3].  Sun H M, et al. PALLD Regulates Phagocytosis by Enabling Timely Actin Polymerization and Depolymerization. J Immunol. 2017 Sep 1; 199(5): 1817-1826. 

        [5].  Wang C,et al. Proteome Analysis of Potential Synaptic Vesicle Cycle Biomarkers in the Cerebrospinal Fluid of Patients with Sporadic Creutzfeldt-Jakob Disease.Mol Neurobiol. 2017 Sep;54(7):5177-5191.

        [6].  Zhang B, et al. Comparative transcriptomic and proteomic analyses provide insights into the key genes involved in high-altitude adaptation in the Tibetan pig.Sci Rep. 2017 Jun 16;7(1):3654.

         

        關鍵詞:
        磷酸化、蛋白組、信號通路、激酶、磷酸化蛋白組、磷酸化芯片
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        發布時間:2021-08-11 17:21:10

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