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      1. 藥物分析

        藥靶篩選
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        小分子靶點篩選服務

        華盈生物在小分子靶點蛋白篩選階段,可提供兩套方案供選擇:方案一,將標記生物素的小分子結合熒光與HuProt人類蛋白質組芯片雜交,通過掃描儀確定能夠結合小分子的芯片蛋白。方案二,將標記生物素的小分子結合SA-瓊脂糖珠子與細胞裂解液進行孵育,沉淀小分子結合蛋白后再通過質譜進行對比鑒定。
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        產品描述

               小分子藥物結合靶點蛋白的發現是進行小分子藥理解釋、小分子減毒增效改造乃至開發出新藥的重要基礎。中藥小分子往往被作為開發新藥的先導化合物,其普遍具有多靶點多功效的特性,找到并明確中藥小分子的藥效靶點對于新藥開發領域具有重要意義?,F階段,在眾多小分子結合靶點篩選實驗中,以生物素標記的小分子為基礎的標記法是小分子靶點發現的主流技術。

         
         
         

        |   小分子靶點篩選體系

               華盈生物建立了基于生物素標記的小分子靶點“雙平臺”篩選體系。首先,針對不同結構的小分子,設計合理化的生物素探針標記策略是小分子靶點篩選體系中核心環節。小分子結構簡單、分子量小、活性位點不明確,在進行生物素標記時需要綜合考量空間位阻、潛在活性位點、小分子的標記得率等諸多因素,標記難度非常大。華盈生物的化學合成專家擁有多年藥物分析化學和化學合成雙重研究背景,我們的小分子生物素標記服務針對每一個化合物進行獨立充分的文獻調研和標記模擬預測,并出具多套生物素標記方案,最大程度地保證標記實驗成功的同時,避免小分子活性的減弱和丟失。

               在小分子靶點蛋白篩選階段,華盈生物提供兩套方案可供選擇:方案一,將標記生物素的小分子結合熒光與HuProt人類蛋白質組芯片雜交,通過掃描儀確定能夠結合小分子的芯片蛋白。該方案最大的優勢就是篩選到的靶蛋白即可認定為小分子的直接結合靶點。方案二,將標記生物素的小分子結合SA-瓊脂糖珠子與細胞裂解液進行孵育,沉淀小分子結合蛋白后再通過質譜進行對比鑒定。該方案最大的優勢就是可以發現存在于細胞內的分子互作蛋白網絡。

         

         方案1:Huprot 20K人類蛋白質組芯片策略

         

               HuProt™20K人類蛋白組芯片,芯片上有超過2萬種人類全長蛋白質,覆蓋81%的人類基因組ORF區,是目前世界上通量最高的蛋白質芯片。重組蛋白采用酵母表達系統,逐個進行表達與純化鑒定。在芯片上每個蛋白質均設置技術重復,并設有多種質控點,確保實驗體系穩定可靠。

         

         

               采用人類蛋白質組芯片篩選小分子靶點,既能夠明確確定小分子與靶點蛋白是直接結合關系。而且,由于芯片上的蛋白質是由酵母表達純化,蛋白的豐度有保證。因此,該方案還可以發現傳統技術在細胞內環境中由于蛋白低豐度問題而難以捕捉的藥-靶結合事件。

         

        |   技術路線

         

         

        |   經典案例:蛋白組芯片發現雷公藤紅素多效潛能

         

         方案2:經典Pulldown+MS策略

              Pulldown+MS策略,是小分子靶點蛋白篩選的經典策略,該策略最大的優勢是能夠發現細胞內小分子結合蛋白及其互作網絡譜。在華盈生物的技術體系中,我們建議Pulldown+MS策略與人類蛋白質組芯片策略結合起來使用,這樣的結合既能夠通過芯片技術明確小分子直接結合的靶點蛋白,又可以在質譜技術發現的蛋白互作網絡譜基礎上,擴大對小分子作用機理的系統認知。

         

        |   技術路線

         

        |   經典案例:Pulldown + MS 發現蘇木酮A的蛋白靶點

        |   客戶文獻

        [1]. Zhou Wen-Jie, Yang Hui-Li, Mei Jie, et al. Fructose-1,6-bisphosphate prevents pregnancy loss by inducing decidual COX-2 macrophage differentiation. Sci Adv, 2022, 8: eabj2488. IF=14.136

        [2]. Wang Guoqing, Li Xingran, Li Na, et al. Icariin alleviates uveitis by targeting peroxiredoxin 3 to modulate retinal microglia M1/M2 phenotypic polarization. Redox Biol, 2022, 52: 102297. IF=11.799

        [3]. Zhang Pengfei, Tao Weiwei, Lu Cai, et al. Bruceine A induces cell growth inhibition and apoptosis through PFKFB4/GSK3β signaling in pancreatic cancer. Pharmacol Res, 2021, 169: 105658. IF=7.658

        [4]. Yang Lehe, Zhou Feng, Zhuang Yan, et al. Acetyl-bufalin shows potent efficacy against non-small-cell lung cancer by targeting the CDK9/STAT3 signalling pathway. Br J Cancer, 2021, 124: 645-657. IF=7.640

        [5]. Zheng Yiyuan, Huang Chaoyuan, Zhao Lina, et al. Regulation of decorin by ursolic acid protects against non-alcoholic steatohepatitis. Biomed Pharmacother, 2021, 143: 112166. IF=6.529

        [6]. Chen Wenjin, Jia Weiqiang, Wu Cuiying, et al. The Neurogenic Compound P7C3 Regulates the Aerobic Glycolysis by Targeting Phosphoglycerate Kinase 1 in Glioma. Front Oncol, 2021, 11: 644492. IF=6.244

        [7]. Ye Shiju, Luo Wu, Khan Zia A, et al. Celastrol Attenuates Angiotensin II-Induced Cardiac Remodeling by Targeting STAT3. Circ Res, 2020, 126: 1007-1023. IF=17.367

        [8]. Chen Xi, Zhao Ying, Luo Wu, et al. Celastrol induces ROS-mediated apoptosis via directly targeting peroxiredoxin-2 in gastric cancer cells. Theranostics, 2020, 10: 10290-10308. IF=11.556

        [9]. Chen Xin-Jie, Zhang Wei-Na, Chen Bing, et al. MYC Homoharringtonine deregulates  transcriptional expression by directly binding NF-κB repressing factor. Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116: 2220-2225. IF=11.205

         

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