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      1. 外泌體研究

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        外泌體RNA數字PCR服務

        微滴式數字PCR技術不僅有效提高了核酸分子的擴增效率,而且由于采用微滴計數的方法進行定量,從根本上突破了基于熒光強度進行定量的技術限制,并可對所測樣品中的核酸分子進行絕對定量。數字PCR的檢測靈敏度相比普通RT-PCR提高了10-100倍,樣本用量也減少了10倍以上。
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        產品描述

         

               微滴式數字PCR(Droplet digital PCR),又稱為“油包水PCR”或“ddPCR”。在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。微滴式數字PCR技術不僅有效提高了核酸分子的擴增效率,而且由于采用微滴計數的方法進行定量,從根本上突破了基于熒光強度進行定量的技術限制,并可對所測樣品中的核酸分子進行絕對定量。數字PCR的檢測靈敏度相比普通RT-PCR提高了10-100倍,樣本用量也減少了10倍以上。

         

         

        |   華盈生物數字PCR服務

               基于數字PCR在靈敏度上的絕對優勢,在外泌體RNA這種ng級微量樣品的檢測和驗證時尤為適用。當外泌體RNA量較少時,數字PCR可以在0.1ng的基礎上進行穩定檢測,而普通RT-PCR的檢測起始量一般在1ng左右,很難完成多個基因的檢測工作。華盈生物將數字PCR納入到外泌體RNAs(miRNA、mRNA、lncRNA和circRNA)測序驗證和獨立檢測實驗中,并建立了嚴謹可靠的技術路線,為獲得可靠的數字PCR數據提供了保障,具體服務流程如下:

         

         

         

        |    經典案例:發現外泌體miRNA標志物:SmallRNA測序+數字PCR

         

         

               在56例血漿外泌體中通過Small RNA測序技術篩選,研究人員發現6種miRNA在子宮內膜癌與健康對照間存在顯著差異。該6種miRNA形成的組合對于子宮內膜癌的診斷效能AUC達到0.983。進一步通過與TCGA數據庫比對,發現這6種miRNA在腫瘤組織中的表達趨勢與血漿外泌體一致。

         

               為節約樣本,研究人員采用了靈敏度更高的微滴數字PCR技術,對202例獨立血漿樣本進行了驗證,結果顯示3種miRNA可以完全驗證測序結果。將這3種miRNA與傳統標志物TB形成組合,能夠將子宮內膜癌的診斷效能AUC提高到0.904。并且對于早期(Stage I )的子宮內膜癌的診斷效能AUC可達到0.915。

        |   相關文獻

        [1]. Lanyun Zhou, Wei Wang, Fenfen Wang, et al. Plasma-derived exosomal miR-15a-5p as a promising diagnostic biomarker for early detection of endometrial carcinoma. Mol Cancer. 2021 Mar 29;20(1):57. IF=27.401

        [2]. Shi-Ji Li, Zhi-Wen Cai, Hong-Fu Yang, et al. A Next-Generation Sequencing of Plasma Exosome-Derived microRNAs and Target Gene Analysis with a Microarray Database of Thermally Injured Skins: Identification of Blood-to-Tissue Interactions at Early Burn Stage. J Inflamm Res. 2021:14 6783–6798. IF=6.922

        [3]Zhiwu Dong, Hongjun Gu, Qiang Guo,et al. Profiling of Serum Exosome MiRNA Reveals the Potential of a MiRNA Panel as Diagnostic Biomarker for Alzheimer's Disease. Mol Neurobiol. 2021 Jul;58(7):3084-3094. IF=5.590

        關鍵詞:
        外泌體
        RNA
        外泌體microRNA的檢測技術
        mRNA
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        發布時間:2021-08-11 17:21:10

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