重生之玩遍女明星目录,庙中求子被僧人C燕氏,辣文小寡妇,性奴大乳清纯校花调教记

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      1. 外泌體研究

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        qEV尺寸排阻外泌體分離柱

        qEV尺寸排阻外泌體分離柱具有簡便、快速、容易標準化操作的特點,只需要15min就可以從多種類型樣本中提取到完整的高純度外泌體。并且相較于其他方法,qEV所提取的外泌體純度更高、活性也更高,更適合蛋白組學研究。
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        產品描述

         

               qEV尺寸排阻分離柱是由新西蘭IZON公司研發和生產的一種基于尺寸排阻法色譜法(Size Exclusion Chromatography, SEC)原理的外泌體分離-純化技術。該技術具有簡便、快速、容易標準化操作的特點,只需要15min就可以從多種類型樣本中提取到完整的高純度外泌體。并且相較于其他方法,qEV所提取的外泌體純度更高、濃度更高、活性也更高,還可以重復使用。qEV分離的外泌體尤其適用于外泌體蛋白組和外泌體功能實驗之用。

         

         
         

         

        |   qEV尺寸排阻外泌體分離柱-原理

                qEV是基于分子排阻法SEC原理,按照分子粒徑進行分段分離的方法。將生物樣品流經具有固定孔隙的SEC填充物,吸附粒徑較小的分子如蛋白、脂類等,而較大粒徑的分子或顆粒不能進入孔隙。在緩沖液的作用下,較大粒徑的囊泡(外泌體)流速快,在特定的階段會被洗脫出來進入樣品收集管,成為實驗樣品,而小分子物質則需要更長的洗脫時間,最終在特定時間流入廢液缸。

        |   qEV尺寸排阻外泌體分離柱-操作流程(點擊觀看視頻

        1. 用洗脫緩沖液沖洗柱子。

        2. 裝入500μL樣品。

        3. 最開始的3ml是空隙體積,繼續向分離柱中添加PBS以洗脫囊泡(外泌體)。

        4. 收集空隙體積后的1.5mL液體為高純度外泌體。

        |   qEV尺寸排阻外泌體分離柱-優勢

         ●   高純度:去除99%以上的可溶性蛋白質,去除95%以上高密度脂蛋白

         ●   無損傷:保持細胞外囊泡的完整性和生物功能

         ●  標準化:每根分離柱均經過標準化、質量保證,并通過ISO13485標準認證

         ●  可靠性:只要15min就可以得到完整外泌體樣本,已經在大規模的實驗室試驗得到證實

         ●  適用性:適用于多種類型樣品的外泌體提取,包括:血清、血漿、尿液、細胞上清、腦脊液、唾液等;尤其適用于外泌體功能研究中,用于細胞培養或動物注射的高純度外泌體的獲得

               如上圖所示,血清樣品中收集的組分,用qNano其進行定量測量。在280納米處用吸光度法測定蛋白質的相對濃度。數據表明,收集的第7至9組分具有最高濃度的囊泡(外泌體),而污染的血清蛋白洗脫的分數為第11至30組分(左圖)。通過比較分離前和分離后的囊泡(外泌體)與蛋白質濃度比,第7組分的囊泡富集量為蛋白質的6000倍(右圖)。根據樣品的不同,如果下游分析分別需要更高的囊泡(外泌體)純度或更高的囊泡(外泌體)產量,可將第7至9部分或第7至11部分匯集在一起。

        |   qEV尺寸排阻外泌體分離柱-產品規格

         

        qEV與超速離心技術的對比

        案例1   尺寸排阻SEC比超離UC獲取外泌體的純度更高

               

               該文獻通過對滑膜液經過相同的預處理后,分別使用超離、密度梯度離心和尺寸排阻進行外泌體的分離。并通過WB、TEM對其進行鑒定分析。

              上圖中紅框所示的ApoA-1是HDL的標志物,可以發現UC和DGC都無法有效去除HDL,而SEC的WB圖中,外泌體標志物的出現和HDL標志物和血清白蛋白的出現幾乎不存在時間上的重疊,所以SEC可以收集到比較純凈的外泌體。

               上圖中超離電鏡下的圖像,不僅背景雜質多,而且發生了聚集現象,這種聚集會對下游分析產生較大不利影響。相比之下,SEC的背景純凈,外泌體特征明顯。

         

        案例2   尺寸排阻SEC比超離UC獲取外泌體生物活性更強

               該實驗研究了使用超離UC和尺寸排阻SEC分離的心肌祖細胞(HMECs)培養液的外泌體的功能可能的差異。通過外泌體刺激細胞,誘導EKR磷酸化,然后通過比較外泌體刺激后的pEKR和EKR的比率,來評價不同分離方法制備外泌體的功能活性。

              上圖WB顯示,在相同條件下,無論總蛋白量變化還是粒子數變化,用SEC的方法比超離他的pERK / ERK比率更高,表明SEC收集到的外泌體具有更高的生物活性。

         

        案例3 尺寸排阻SEC比超離UTC更適合進行血漿外泌體蛋白質組學分析

               該文獻通過高分辨質譜分析,比較了SEC和UTC分離的血漿外泌體,在五次技術重復中鑒定的蛋白數量、信號強度等方面的差異。結果發現,相較于超離,SEC得到的外泌體,蛋白鑒定數量更多(圖A,SEC 1,268±102,UTC 319±45),相同蛋白的定量CV值更?。▓DB,SEC 562種蛋白質的CV低于25%,而UTC只有73種蛋白質達到這一閾值),且相同外泌體marker蛋白,SEC信號值普遍比UTC更高(圖C)。

              上述幾篇文獻將尺寸排阻SEC與超離UC、密度梯度離心DGC在收集到外泌體的純度、生物活性和得率方面作比較,通過實驗數據、電鏡圖、WB圖像,發現SEC相較于其他兩種分離方法,獲取的外泌體純度更高、生物活性更強、更適合蛋白組學實驗。

        |   相關文獻

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        [3]. Xing F, et al. Loss of XIST in Breast Cancer Activates MSN-c-Met and Reprograms Microglia via Exosomal miRNA to Promote Brain Metastasis. Cancer Res. 2018 Aug 1; 78(15): 4316-4330.
        [4]. Bao L, et al. Metastasis-associated miR-23a from nasopharyngeal carcinomaderived exosomes mediates angiogenesis by repressing a novel target gene TSGA10. Oncogene. 2018 May; 37(21): 2873-2889.

        [5]. Ramirez M, et al. Technical challenges of working with extracellular vesicles. Nanoscale. 2018 Jan 18; 10(3): 881-906.

        [6]. Jurkoshek KS, et al. Interspecies Communication between Pathogens and Immune Cells via Bacterial Membrane Vesicles. Front Cell Dev Biol. 2016 Nov 11; 4: 125.

        [7]. Lobb RJ, et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma. J Extracell Vesicles. 2015 Jul 17; 4: 27031.
        [8]. Mol EA,et al.Higher functionality of extracellular vesicles isolated using size-exclusion chromatographycompared to ultracentrifugation.Nanomedicine2017 Aug;13(6):2061-2065. 
        [9]. Takov K,et al.Comparison of small extracellular vesicles isolated from plasma by ultracentrifugation or size-exclusion chromatography: yield, purity and functional potential.J Extracell Vesicles..2018 Dec 28;8(1):1560809. 

        關鍵詞:
        外泌體、超速離心、超離、尺寸排阻、SEC
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