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      1. 外泌體研究

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        ESQ外泌體示蹤試劑盒

        華盈生物開發了ESQ3外泌體快速熒光標記試劑盒,最大的優點是標記全程無需超速離心,而且30分鐘內即可完成外泌體熒光標記與純化,得到的熒光標記外泌體可用于細胞吞噬與示蹤實驗。
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        產品描述

         

               外泌體是由細胞分泌的直徑約為30~150nm的小囊泡,具有典型的脂質雙分子層結構。外泌體攜帶多種功能分子如蛋白、核酸和脂質,參與細胞間的交流、物質運輸以及正常的生理過程維持,與疾病的發生進展密切相關。外泌體功能研究中首先需要熒光標記外泌體示蹤其是否被受體細胞攝取。然而,熒光標記外泌體結束后是否能夠完全去除游離熒光,往往會影響后續實驗結果的可靠性。

         

         
         
                
                
               常規去除游離熒光需要用到超速離心,然而該方法不僅設備昂貴,而且耗時長,回收率低,增加了實驗的難度和風險。為了解決以上難點,華盈生物開發了外泌體快速熒光標記試劑盒(Exosome Staining Q Kit,ESQ,該試劑盒最大的優點是標記全程無需超速離心,而且30分鐘內即可完成外泌體熒光標記與純化,得到的熒光標記外泌體可用于細胞吞噬與示蹤實驗。
         
         
        |   產品特點

        操作快速:一次全反應僅需20分鐘

        過程便捷:無需大型儀器,一般實驗室均可滿足

        標記效率高:10μg外泌體標記效率大于90%

        純化效果好:有效去除90%以上游離熒光

        回收率高:10μg外泌體回收率大于70%

        |   試劑盒實測數據

               熒光分光光度計檢測經過熒光吸附柱(試劑盒中提供)前后的熒光染料,結果顯示熒光吸附柱純化后的染料相對熒光單位顯著下降。表明熒光吸附柱可有效去除游離熒光(圖1)。

        圖1 熒光吸附柱去除游離熒光測試

         

                取5μg ,10μg尿液外泌體分別進行3次熒光標記,經納米流式NanoFCM檢測,標記效率均大于90%,且具有良好的重復性(圖2)(注意:不同起始量的不同來源外泌體的標記效率以實際標記結果為準)。

         圖2 外泌體標記效率測試

               取5μg ,10μg尿液外泌體分別進行3次熒光標記(綠色)重復實驗,純化后的外泌體,經qNano(TRPS外泌體計數技術)計數檢測,標記后的外泌體的回收率均大于70%,且具有較好的重復性(圖3)(注意:不同起始量的不同來源外泌體的回收效率以實際回收結果為準)。

        圖3 熒光標記外泌體的純化回收率測試

         

               終濃度5μg/ml PKH67熒光標記的尿液外泌體與Raw264.7細胞共孵育0h、4h、24h,流式細胞儀檢測結果顯示熒光信號逐漸增強,說明吞噬外泌體的細胞數量隨著孵育時間的延長而增加(圖4)。

         

         4 納米流式檢測細胞吞噬熒光標記純化的外泌體

         

        終濃度36μg/ml 紅色熒光標記的HeLa細胞外泌體,3T3細胞共孵育24h,細胞骨架和細胞核分別用鬼筆環肽和 DAPI 標記,激光共聚焦顯微鏡掃描結果表明:標記的外泌體 (紅) 定位于3T3細胞核周區域,證實了外泌體被內化。

        5 共聚焦顯微鏡觀察細胞吞噬熒光標記純化的外泌體(400×)

         

         

        點擊下載:ESQ外泌體示蹤試劑盒產品說明書

         

        關鍵詞:
        外泌體、外泌體示蹤、外泌體功能實驗
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        戰略合作

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        發布時間:2021-08-11 17:21:10

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