重生之玩遍女明星目录,庙中求子被僧人C燕氏,辣文小寡妇,性奴大乳清纯校花调教记

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      1. 質譜技術

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        IMC空間蛋白質組學

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        蛋白質組學
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        產品描述

        IMC(Imaging Mass Cytometry)空間蛋白質組學技術是在CyTOF(Mass Cytometry)單細胞質譜流式技術的基礎上,擴展和延伸出來的成像質譜流式技術。與CyTOF相比,IMC增加了Hyperion 組織質譜成像組件,可以對組織切片,尤其是石蠟組織進行蛋白質組織原位的定性定量檢測。IMC同樣采用抗體結合稀土金屬標簽的形式標記特定細胞蛋白,通過ICP-MS進行金屬標簽識別和檢測,獲取蛋白質及其特定細胞在組織結構中的豐度數據。目前,華盈生物的IMC技術平臺已經對47種重要蛋白標簽抗體進行了驗證,可實現對這些蛋白質的準確檢測。同時,如果現有抗體不能滿足研究需求,華盈生物還可提供特定抗體的定制開發服務。

        |   技術原理

        IMC在2014年由Giesen C等人在Nat Methods發表的研究中首次被應用。他們將新型激光消融裝置引入到質譜儀檢測中。固定在載玻片上的組織切片或細胞用一組稀土金屬標簽偶聯的抗體進行標記后被插入消融室中,在消融室中通過在213nm下操作的脈沖激光掃描組織并聚焦到1μm直徑的光斑大小。來自消融點的組織在每次激光照射時被氣化,并由具有高時間保真度的惰性氣體流攜帶到電感耦合等離子體離子源中,之后通過(CyTOF®) 的質量檢測器進行同步分析。與每個點相關的金屬標簽被同時測量,再根據每個點的坐標位置進行索引。載玻片沿著掃描線在固定的激光束下方逐點移動掃描,順序掃描后最終產生遍及組織或感興趣區域的所有靶蛋白的信號強度圖。經過軟件處理和降維分析,獲得具有組織結構的蛋白分布圖譜和細胞亞群分布圖譜。

         

        (引自 Chang et al. 2017)

        |   檢測流程

        1.   使用與不同稀土金屬偶聯的多種抗體對組織切片或固定化細胞進行同步標記;

        2.   在 Hyperion組織質譜成像組件中通過脈沖激光進行組織消融;

        3.   氣化的樣品通過惰性氣體的等離子體流被驅動到CyTOF質譜儀的質量檢測器進行分析,重建組織以及與每個檢測點豐度的關聯性;

        4.   通過不同的軟件進行信號(圖像)分析和重疊。

         

        (引自 Cereceda et al. 2021)

        |   IMC技術優勢

        ●   IMC擁有CyTOF技術相比于其他技術的所有優勢。例如:IMC技術由于檢測的是蛋白質的Marker,其細胞分型數據相較于單細胞測序更為準確,對于與占比較小的細胞亞群也能夠精確分析。

        ●   重金屬標簽非常穩定,同批標記的抗體,在 2 周內檢測信號依然穩定。不會出現檢測通道之間竄色和相互干擾的情況。

        ●   IMC可在細胞和組織水平上同時檢測多達 47 種蛋白質,其通量遠遠高于常規的免疫組織多重染色技術,可以獲得更加豐富的蛋白質檢測數據。

        ●   IMC技術實現了空間蛋白質組和空間細胞組成的定性定量分析,對于理解疾病發生機理和不同疾病狀態最真實的病因提供了直接證據。并且,這些在組織中表達的特定蛋白質和聚集的細胞亞群,也為進一步的臨床用藥起到了關鍵的指導作用。

        |   IMC檢測列表

               目前,華盈生物的IMC技術平臺已經對47種重要蛋白標簽抗體進行了驗證,可實現對這些蛋白質的準確檢測。同時,如果現有抗體不能滿足研究需求,華盈生物還可提供特定抗體的定制開發服務。

         檢測列表

        |   IMC應用方向

        ●   尋找與疾病發生、發展、復發相關的生物標志物(早期診斷、伴隨診斷、復發預測、疾病分型等)

        ●   特定人群、特定部位的免疫特征分析(如孕婦、胎兒、腸道等)

        ●   新藥藥靶的發現與驗證(先導化合物、激酶抑制劑、單抗藥物等)

        ●   單細胞測序數據的驗證與深入細胞分型

        |   樣本要求

        ●   切片樣本需要用石蠟油密封后4度保存;蠟塊樣本4度保存

        ●   連續切片(Serial sections),便于鎖定目標區域

        ●   厚度小于等于7μm

        ●   組織FFPE樣本盡量新鮮,最好是半年以內制作,以石蠟塊為佳。

        |   應用案例

        案例一 IMC發現了幼年型皮肌炎和紅斑狼瘡組織中不同的空間細胞亞型

        研究者對6例幼年型皮肌炎(JDM)和4例紅斑狼瘡患者(cSLE)的皮膚組織進行了IMC分析,總共檢測了包含CD14, CD15, CD16, CD56, CD68, CD11c, HLA-DR, BDCA2, CD20, CD27, CD138, CD4, CD8, E-cadherin, CD31, pan-keratin 和 collagen type I的17個蛋白。結果在JDM和cSLE皮膚中鑒定了14個細胞群,包括CD14+和CD68+巨噬細胞、骨髓和漿細胞樣樹突狀細胞 (pDC)、CD4+和CD8+ T細胞和B細胞??傮w而言,cSLE皮膚有較高的炎癥細胞浸潤,CD14+巨噬細胞、pDC和 CD8+ T細胞以及免疫-免疫細胞互作顯著增加。而JDM皮膚表現出更強的先天免疫特征,具有更高的CD14+巨噬細胞占比和顯著增加的內皮-免疫細胞間的空間互作關系。

         

        案例二 IMC揭示先心病組織的免疫微環境特征

        2022年發表在Nature上的一項研究通過IMC技術分析了先心?。–HD)患者心臟組織免疫微環境的狀態和特征。研究者檢測了21個患者和正常捐獻者心臟組織切片的23個炎癥蛋白。成簇分析鑒別了11個血管周細胞簇,這些細胞簇包含了血管平滑肌細胞、巨噬細胞、成纖維細胞和內皮細胞等。特別是鑒定了3個分別表達CD68, CD14 and CD163的巨噬細胞(MΦ1–MΦ3)。其中MΦ1和MΦ2的定位鄰近與那些表達免疫抑制因子(PD-L1、CD73、CD33)的T細胞,說明了這些巨噬細胞和抑制性T細胞間存在非常重要的關聯。結合心臟組織的單細胞測序結果,發現了MΦ2細胞高表達IFNγ信號基因,而IFNγ可以通過誘導PD-L1的表達抑制T細胞活性,因此IMC對單細胞測序提供了組織空間水平上的驗證。最后研究者發現了定位在ACTA2+ 血管附近的表達抗炎癥蛋白的T細胞數目在患者中顯著高于正常捐獻者,說明了先心病患者的心臟組織處于免疫抑制狀態。

         

         

        |   相關文獻

        1.  Giesen C, Wang HA, Schapiro D, Zivanovic N, Jacobs A, Hattendorf B et al. Highly multiplexed imaging of tumor tissues with subcellular resolution by mass cytometry. Nat Methods. 2014;11(4):417-422. 

        2.  Chang Q, Ornatsky OI, Siddiqui I, Loboda A, Baranov VI, Hedley DW. Imaging Mass Cytometry. Cytometry A. 2017;91(2):160-169. 

        3.  Cereceda K, Jorquera R, Villarroel-Espíndola F. Advances in mass cytometry and its applicability to digital pathology in clinical-translational cancer research. Adv Lab Med 2022;3(1): 5–16.

        4. Turnier JL, Yee CM, Madison JA, Rizvi SM, Berthier CC, Wen F, Kahlenberg JM. Imaging mass cytometry reveals predominant innate immune signature and endothelial-immune cell interaction in juvenile myositis compared to lupus skin. Arthritis Rheumatol. 2022. Online ahead of print. 

        5. Hill MC, Kadow ZA, Long H, Morikawa Y, Martin TJ, Birks EJ et al. Integrated multi-omic characterization of congenital heart disease. Nature. 2022. Online ahead of print.

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